Trong trò chơi nhập vai này, bạn sẽ vào vai nhân vật Isaac và phải giúp anh ta thoát khỏi cái chết sắp xảy ra của mình. Sau khi mẹ Isaac nhận được tin nhắn từ Chúa Trời yêu cầu hiến tế, bà khoá Isaac trong tầng hầm. Tuy nhiên, có nhiều thứ đáng sợ trong tầng hầm này mà dần Isaac sẽ phải đối mặt như các quái vật, các anh chị và cuối cùng chính là người mẹ mình. Đây có thể nói là một thể loại game Dungeon.
Bạn sẽ chơi lần lượt vòng này tới vòng khác và sẽ không lập lại các vòng. Game có hơn 100 bình tăng năng lượng với 4 chương tách biệt mỗi chương gồm 8 cấp độ. Trong khi đó, có hơn 50 loại quái vật bao gồm một vài trùm khó. Cùng với các cảnh chơi chưa được mở khóa người dùng sẽ muốn chơi đi chơi lại game.
Điều khiển khá cơ bản chỉ với phím WASD và các phím mũi tên có tác dụng điều hướng hỏa lực. Và vũ khí của bạn là gì? Đó là nước mắt. Nếu càng khóc, nhân vật chơi càng mạnh mẽ. Binding of Isaac còn phá cách khi trộn các nội dung người lớn với đồ họa hoạt hình. Trong khi phần audio khá trầm và mang kịch tính khá phù hợp với nội dung game.
